TD électrophorèse 5 Dr BEKHOUCHE S

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On considère une installation d’électrophorèse capillaire comportant un capillaire de verre de silice non-traitée, à « paroi négative », de L = 1 m de longueur totale et de l = 90 cm de longueur utile (jusqu’au détecteur). La différence de potentiel appliquée aux bornes du capillaire est de 20 kV. Le détecteur est situé vers l’extrémité cathodique du capillaire.
L’électrolyte est un milieu tampon de pH 5. Un composé présent dans l’échantillon a un temps de migration tm = 10 min.
a) Peut-on en déduire si la charge nette portée par ce composé est positive ou négative ?
b) Calculer la mobilité électrophorétique apparente µapp de ce composé.
c) Sachant qu’un marqueur neutre a un temps de migration tm de 5 min, en déduire la valeur du flux électro-osmotique µEOS.
d) Calculer la mobilité électrophorétique µEP du composé. En déduire le signe de sa charge nette.
e) Que se passerait-il si on utilisait un capillaire à paroi traitée pour la rendre neutre ?
f) En supposant que le pI du composé soit de 4, quel sera le signe de sa charge nette si on abaisse le pH de l’électrolyte à 3 ?
g) Calculer N pour le composé étudié sachant que D = 2 × 10−5 cm2 .s−1.
h) Connaissant la relation entre l’efficacité N et la diffusion D, expliquer pourquoi les petites molécules conduisent en électrophorèse capillaire à des séparations généralement moins bonnes que les grosses molécules, et pourquoi les séparations sont d’autant meilleures que le diamètre du capillaire est plus étroit.