Как обнаружить белки с помощью флуоресцентного вестерн-блоттинга

Описание: В этом видео показано, как обнаруживать целевые белки с помощью флуоресцентных реагентов в рамках мультиплексного вестерн-блоттинга.

Узнайте больше:
https://www.thermofisher.com/us/en/ho...

Смотрите больше:
   • Flow Cytometry Setup & Analysis  

Что вы узнаете:
• Как работает вестерн-блоттинг на основе флуоресценции • Как работает флуоресцентная детекция белков на одном блоте
• Как выполнить мультиплексную детекцию белков на одном блоте
• 5 ключевых этапов в рабочих процессах флуоресцентного вестерн-блоттинга
• Как уменьшить фоновый шум и улучшить четкость сигнала
• Когда флуоресцентная детекция предпочтительнее хемилюминесценции

Используемые материалы:
• Флуоресцентные реагенты для детекции вестерн-блоттинга
• Мембрана для вестерн-блоттинга (PVDF или нитроцеллюлоза)
• Флуоресцентно меченые вторичные антитела
• Блокирующие и промывочные буферы
• Система визуализации вестерн-блоттинга с возможностью флуоресценции

Рассматриваемые этапы:
• Блокирование мембраны для уменьшения неспецифического связывания.

• Инкубация с первичными антителами, нацеленными на интересующие белки.

• Нанесение флуоресцентных вторичных антител для мультиплексной детекции.

• Промывка для удаления несвязанных антител и уменьшения фонового шума.

• Визуализация и анализ флуоресцентных сигналов для каждого целевого белка.

РАЗДЕЛЫ:
00:00 – Зачем использовать флуоресценцию для обнаружения белков на вестерн-блоттинге
00:35 – Обзор флуоресцентного вестерн-блоттинга
01:20 – Шаг 1: Блокирование и подготовка антител
02:05 – Шаг 2: Инкубация с флуоресцентными антителами
02:55 – Шаг 3: Промывка и снижение фонового сигнала
03:40 – Шаг 4: Визуализация флуоресцентных сигналов
04:35 – Шаг 5: Мультиплексный анализ и интерпретация

Часто задаваемые вопросы
В: Зачем использовать флуоресцентное обнаружение на вестерн-блоттинге?
Флуоресцентное обнаружение позволяет проводить мультиплексирование, обеспечивает более широкий динамический диапазон и более точное количественное определение.

В: Можно ли обнаружить несколько белков на одном блоте?

Да, флуоресцентное обнаружение позволяет одновременно обнаруживать несколько мишеней без удаления флуоресценции.

В: Является ли флуоресцентный вестерн-блоттинг количественным методом?

Да, он поддерживает линейный количественный анализ белков при надлежащей оптимизации.

Соответствие требованиям
Только для исследовательских целей. Не для диагностических процедур.

#ВестернБлот #ФлуоресцентныйВестернБлот #ОбнаружениеБелков #Мультиплексирование #БиологияБелков #ТермоФишер #ЛабораторныеТехники