Как оценить белок?

Описание: Анализ белка по Лоури — это биохимический метод определения общего содержания белка в растворе. Концентрация общего белка определяется изменением цвета раствора образца пропорционально концентрации белка, которую затем можно измерить колориметрическими методами. Метод назван в честь биохимика Оливера Х. Лоури, разработавшего этот реагент в 1940-х годах.

Метод сочетает реакции ионов меди с пептидными связями в щелочной среде (биуретовая проба) с окислением ароматических остатков белка. Метод Лоури наиболее эффективен при концентрации белка 0,01–1,0 мг/мл и основан на реакции Cu+, образующегося при окислении пептидных связей, с реагентом Фолина-Чокальтеу (смесь фосфорновольфрамовой и фосформолибденовой кислот в реакции Фолина-Чокальтеу). Механизм реакции изучен недостаточно, но включает восстановление реагента Фолина и окисление ароматических остатков (в основном триптофана, а также тирозина). Эксперименты показали, что цистеин также реагирует с реагентом. Следовательно, остатки цистеина в белке, вероятно, также вносят вклад в поглощение, наблюдаемое в тесте Лоури. Концентрация восстановленного реагента Фолина измеряется по поглощению при длине волны 750 нм. В результате общая концентрация белка в образце может быть определена по концентрации остатков Trp и Tyr, восстанавливающих реагент Фолина.