کار با دستگاه نانودراپ – اسپکتروفوتومتری-Nano Drop

Описание: تکنیک اسپکتروفوتومتری بررسی جذب نوری یک ترکیب درون حلال می باشد. این تکنیک جهت دستیابی به غلظت ماده حل شونده مورد استفاده قرار می گیرد. عموما در آزمایشگاه های زیست شناسی نور تابانده شده به محلول در محدوده نور فرابنفش و مرئی می باشد. در این تکنیک نور تکفام با طول موج مشخص، به نمونه تابیده شده و پس از عبور نور از نمونه میزان جذب نوری محلول توسط دستگاه سنجیده می شود. بر اساس قانون بیر-لامبرت میزان جذب نوری با غلظت ترکیب مورد نظر رابطه مستقیم دارد. بعبارتی هرچقدر غلظت ترکیب بیشتر باشد، میزان جذب نوری آن بیشتر خواهد بود. توجه داشته باشید انجام تکنیک اسپکتروفوتومتری منوط به آن است که ترکیب ما در یک طول موج مشخص واقع شده در محدوده فرابنفش-مرئی، جذب داشته باشد.
نانودراپ (NanoDrop) نیز یکی از انواع دستگاه های اسپکتروفوتومتر است که نسبت به دستگاه های قدیمی برتری های زیادی دارد. نانودراپ (NanoDrop) می تواند جذب چندین نمونه را با دقت بسیار بالا به شکل همزمان اندازه گیری کند. از این دستگاه در انجام تست های الایزا نیز می توان استفاده کرد و تا 96 نمونه را همزمان مورد بررسی قرار داد. همچنین نانودراپ (NanoDrop) به کامپیوتر متصل شده و با نرم افزار های مرتبط لینک شده و تمام محاسبات را به شکل خودکار انجام می دهد. یکی دیگر از برتری های این دستگاه، نیاز به نمونه در حجم های بسیار کم می باشد.
کار با دستگاه نانودراپ:
پس از آماده سازی نمونه ها، پلیت مخصوص نانودراپ (NanoDrop) را باز کرده و نمونه های خود را لود می کنیم. چاهک های بالا با نمونه Blank که شامل حلال بدون حل شونده می باشد، پر می شوند. سپس به ترتیب در چاهک های دیگر نمونه های مورد نظر لود می گردند. در اینجا نمونه مورد سنجش، DNA می باشد. سپس پلیت در دستگاه قرار گرفته و نرم افزار Gene5 اجرا می گردد. گزینه سنجش غلظت DNA باز شده و گزینه new dDNA انتخاب می گردد. همانطور که گفته شد نمونه های بالا Blank بوده و از قبل توسط دستگاه تعیین شده اند. محل چاهک هایی که با نمونه پر شده اند، در عکس شماتیک پلیت مشخص می گردد. در نهایت با انتخاب گزینه Read دستگاه شروع به تاباندن نور و خواندن جذب آن می کند.
DNA در طول موج 260 نانومتر بیشترین جذب را داراست. لذا سنجش جذب باید در این محدوده انجام گردد. دستگاه نانودراپ (NanoDrop) توانایی سنجیدن نمونه در چند طول موج با برنامه ریزی از پیش وارد شده و به شکل اتوماتیک را داراست. ضرورت اینکار برای به دست آوردن خلوص ترکیب مورد نظر در محلول می باشد.