# Tuto utilisation micropipette en SVT - Hervé Kempf - Lycée de l'Elorn - Landerneau

Описание: Tuto utilisation micropipette en SVT - Utilisation de la micropipette ou pipette automatique. La micropipette encore appelée pipette automatique est un instrument de précision utilisé depuis 1974 pour la manipulation de micro-volumes de liquides en biologie moléculaire et en chimie analytique. Une large gamme de micropipette référencée P 1000 à P 2 permet de prélever avec une très grande précision des volumes de 1000 µL à 0,1 µL. Dans notre tuto on utilisera une micropipette P50 à volume variable dont la plage de prélèvement va de 5 à 50 µL soit environ le v olume d’une goutte d’eau. La micropipette peut être pré-réglée, dite à « volume fixe », ou à réglage manuel, dite à « volume variable ». Dans le cas d’une micropipette à volume variable, il convient de commencer par régler le volume désiré, qui doit se situer dans la plage de capacité de la micropipette utilisée. Pour ce faire, il suffit de visser ou dévisser le piston, et de suivre les chiffres à l’écran jusqu’au volume choisi. Attention à ne jamais dépasser ces limites ce qui endommagerait la micropipette. Dans un second temps, une pointe adaptée appelées embout ou cône stérile est installée à l’extrémité de la micropipette. C’est elle qui recueillera le liquide prélevé. On prélève un embout en appliquant le bout de la micropipette dans le col de l'embout.
En appuyant un peu, l'embout s'enfonce sur le joint d’étanchéité et peut être retiré de la boîte. La pipette est conçue de manière à ce que la prise en main soit stable et confortable. Le crochet se place à la base de l’index. Le pouce doit avoir facilement accès au piston et au bouton d’éjection de la pointe. Les autres doigts viennent envelopper le corps de la pipette. Le pipetage peut maintenant être effectué, par action du pouce sur le piston. Les pipettes automatiques sont dotées de deux crans en fonction de la force qu'on applique sur le piston. Le piston d’une micropipette est pourvu d’une butée après laquelle la force de poussée nécessaire à l’enfoncement total du piston devient plus importante. La première partie de la « descente » soit du piston relâché jusqu’à la butée, correspond précisément au volume réglé sur la pipette, la seconde partie de la « descente » soit de la butée à l’enfoncement total, correspond à un volume excédentaire fixe. Il existe deux techniques de pipetage : le pipetage traditionnel, qui consiste à prélever précisément le volume réglé sur la micropipette et à déposer ce volume dans sa totalité, et le pipetage inverse, qui consiste à prélever un volume supérieur à celui réglé sur la micropipette pour ne déposer ensuite que le volume réglé. Il reste alors du liquide dans la pointe. En pipetage traditionnel, il convient l’actionner le piston jusqu’à la butée, de plonger la pointe dans le liquide à prélever en l’immergeant le moins possible et de relâcher doucement le piston. Le volume de liquide réglé sur la micropipette est à présent dans la pointe. Le dépôt du volume de liquide, réglé sur la micropipette et contenu dans la pointe, se fait en actionnant le piston jusqu’au bout, en dépassant la butée. A la fin de l’opération, la pointe est vide. En pipetage inverse, il convient d’actionner le piston jusqu’au bout, en dépassant la butée, de plonger la pointe dans le liquide à prélever et de relâcher doucement le piston. Le volume de liquide réglé sur la micropipette est à présent dans la pointe, additionné du volume excédentaire correspondant au dépassement de la butée du piston. Le dépôt du volume de liquide réglé sur la micropipette se fait en actionnant le piston jusqu’à la butée. A la fin de l’opération il reste du liquide dans la pointe, qui correspond au volume prélevé en plus par le dépassement de la butée du piston. Une fois le pipetage terminé, la pointe peut être ôtée par action du pouce sur le bouton éjecteur. Le choix du pipetage traditionnel ou inverse dépendra de l’utilisateur, de son expérience, de ses préférences et du type de solution à prélever et à déposer. Avant d’utiliser pour la première fois une micropipette les élèves doivent se familiariser avec son utilisation avec des produits colorés à prélever et déposer avec la méthode traditionnelle et avec la méthode inverse. Au lycée de l’Elorn de Landerneau, les élèves utilisent essentiellement les micropipettes pour les dépôts de gamètes sur la lame de Malassez, de protéines pour les électrophorèses, d’ADN pour la PCR et l’électrophorèse et enfin pour la transgénèse et l’obtention de bactéries et de levures génétiquement modifiées.
Perrine Albéricci, Adjointes techniques, Emilie Costa et Hervé Kempf, Enseignants des S.V.T. au lycée de l’Elorn de Landerneau, avril 2019.