DNA Extraction (Part1)

Описание: *استخلاص الـDNA هو عملية فصل المادة الوراثية من الخلايا لدراستها أو استخدامها في التطبيقات الجزيئية. تمر العملية بثلاث مراحل رئيسية:
تكسير الخلايا (Cell Lysis): باستخدام محاليل تحلل الغشاء الخلوي والنووي لتحرير الـDNA.
إزالة البروتينات والشوائب: عبر أملاح عالية التركيز، إنزيمات محللة للبروتين، أو أعمدة تنقية.
ترسيب وتنقية الـDNA: بإضافة الكحول (إيثانول/أيزوبروبانول) ثم غسله وإذابته في محلول مناسب للحفظ.

*الأدوات والمواد المستخدمة في المعمل
جهاز طرد مركزي (Centrifuge)
ماصّات دقيقة (Micropipettes) ورؤوس معقمة
أنابيب ميكروسنترفيوج
حمام مائي أو حاضنة
جهاز قياس الامتصاص الضوئي (Nanodrop أو Spectrophotometer)
جهاز رحلان كهربائي للهلام (Gel Electrophoresis System)
كواشف الاستخلاص (Buffers، إنزيمات، كحول)
الطرق الشائعة لاستخلاص الـDNA
الطريقة العضوية (Phenol-Chloroform)
طريقة الأعمدة السيليكا (Silica Column-Based Kits)
الخرز المغناطيسي (Magnetic Beads)
طريقة الملح (Salting Out Method)

*يتم اختيار الطريقة حسب نوع العينة والغرض من التحليل.

*تقييم الجودة والتركيز
قياس التركيز والنقاوة طيفيًا:
قياس الامتصاص عند 260 نانومتر لتحديد تركيز الـDNA.
نسبة A260/A280 (≈ 1.8 تدل على نقاوة جيدة).
نسبة A260/A230 (≈ 2–2.2 تشير إلى قلة الشوائب).

*التحقق بالرحلان الكهربائي (Gel Electrophoresis):
ظهور شريط واضح دون تكسير يدل على سلامة الـDNA.
قياس الفلورسنس (Qubit):
*يعطي قياسًا أدق للتركيز باستخدام صبغات خاصة ترتبط بالـDNA فقط.