Técnica de COLORAÇÃO DE GRAM I passo a passo [FÁCIL E RÁPIDO]

Описание: É o método de coloração mais empregado em bacteriologia. Importância do método:
Separa as bactérias em dois grandes grupos: GRAM POSITIVAS e GRAM NEGATIVAS.
-Taxonomia (identificação, classificação e nomenclatura, sendo o primeiro passo no processo de identificação);
Possibilita o diagnóstico presuntivo (preliminar), principalmente em casos de infecções graves e de evolução fatal quando o médico necessita introduzir uma terapêutica, antes mesmo da identificação do microrganismo causador da infecção.
Permite evidenciarmos a contaminação a partir de diferentes materiais.

➡️ PROTOCOLO:
Coletar uma ou duas alçadas da UFC (Unidade Formadora de Colônia) e espalhar na lâmina de maneira que a amostra fique bem espalhada e homogênea, para evitar a sobreposição de células.
Fixar o material biológico na lâmina passando rapidamente pela chama do bico de Bunsen à uma distância de aproximadamente 15 cm (flambagem).
Cobrir a área com a solução de cristal-violeta por cerca de um minuto.
Decantar o cristal-violeta e lavar suavemente com fio de água da torneira (Obs.: lavagem excessiva nesta etapa pode causar a retirada do cristal violeta das células Gram-positivas).
Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo (lugol) durante cerca de um minuto. Lave com fio de água, só uma passagem, apenas para remover o excesso.
Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, apenas por alguns segundos, até que se escorra incolor = máximo 20-30 segundos.
Realizar lavagem com fio de água corrente para parar a descoloração do álcool-acetona. O tempo usualmente utilizado nesta etapa é de cerca de 20 segundos. (Obs.: lavagem excessiva nesta etapa pode causar a retirada do cristal violeta das células Gram-positivas, assim como, a pouca descoloração pode resultar em pouca retirada do cristal violeta, ocasionando uma tonalidade azulada nas bactérias Gram-negativas).
Cobrir o esfregaço com a solução de safranina (ou Fucsina básica 0.1% a 0.2%), por cerca de 30 segundos.
Escorra e deixe secar ao ar livre (ou no bico de Bunsen) e retirar o excesso do líquido com papel filtro nas bordas da lâmina. Para acelerar o processo, secar a lâmina próxima à chama do bico de bunsen com uma distância de aproximadamente 15 cm.
Levar a lâmina ao microscópio e focar na objetiva de 400X. Depois de focado colocar uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observar ao microscópio com aumento de 1000X, utilizando a objetiva de imersão. Procure uma região onde não haja sobreposição de células e analise a morfologia e cor das bactérias.

Fonte: Manual de Microbiologia Clínica, Módulo 6- ANVISA, 2013.
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